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    1.     當前位置:  首頁 服務中心細胞生長和凋亡

      細胞生長和凋亡
      一:MTT法廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。
      MTT主要應用于

      ① 細胞增殖程度的測定;
      ② 細胞活性的測定;
      ③ 藥物或其他因素對培養細胞的毒性測定;
      MTT服務流程
      ① 收集對數生長期細胞并計數;
      ② 接種細胞;配成單細胞懸液,接種于96孔板,接種密度為每孔103-104;
      ③ 培養細胞:5%CO2,37℃孵育,培養1天~5天(需根據試驗目的和要求決定培養時間);
      ④ 加入MTT溶液,繼續孵育4 h~6h;
      ⑤ 終止培養,去除培養上清液;
      ⑥ 加入DMSO,脫色搖床振蕩10min,使結晶物充分融解;
      ⑦ 酶聯免疫監測儀選擇490nm或570nm波長,測定各孔光吸收值;
      ⑧ 記錄結果,繪制細胞生長曲線。
      實驗周期
      ① 1-10個樣本,7個工作日
      ② 10-100個樣本,10個工作日
      ③ 100個樣本以上,20個工作日
      提供結果
      完整的實驗操作步驟、吸光度值、細胞生長曲線圖、MTT統計分析圖等結果。

      二:FCM檢測細胞周期技術服務

      MTT法難以客觀反映細胞毒活性。近年來,隨著流式細胞術的不斷發展和普及,建立了以熒光素標記靶細胞并結合細胞毒相關酶染料檢測細胞毒活性的流式細胞術體內和體外分析方法。
      1、 FCM檢測細胞周期服務流程
      ① 培養細胞,分為陰性對照組與細胞凋亡誘導組等實驗組;
      ② PBS清洗細胞2~3次,調整細胞密度為1×106個/ml;
      ③ 將細胞懸液100ul轉移至試管中;
      ④ 加入FITC標記的annexin V和PI溶液,輕輕混勻;
      ⑤ 室溫避光放置10~15min;
      ⑥ 加入400ul 1×結合緩沖液,將全部液體轉移至FACS分析用試管;
      ⑦ 盡快進行FACS分析。
      注:以上流程是以PS外翻法為例,根據FCM檢測細胞凋亡方法不同,操作步驟有所區別。
      實驗周期
      ① 1-10個樣本,7個工作日
      ② 10-50個樣本,20個工作日
      ③ 50個樣本以上,30個工作日
      提供結果
      完整的實驗操作步驟、FCM細胞周期分布、實驗數據等結果。

      訂購信息
      郵箱:order@chiscientific.cn
      電話:400-8822-003
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