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    1.     當前位置:  首頁 服務中心細胞轉染和調控

      細胞轉染和調控

      常規轉染技術可分為兩大類,一類是瞬時轉染,一類是穩定轉染(永久轉染)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,因此一個宿主細胞中可存在多個拷 貝數,產生高水平的表達,但通常只持續幾天,多用于啟動子和其它調控元件的分析。一般來說,超螺旋質粒DNA轉染效率較高,在轉染后24-72小時內(依 賴于各種不同的構建)分析結果,常常用到一些報告系統如熒光蛋白,β半乳糖苷酶等來幫助檢測。后者也稱穩定轉染,外源DNA既可以整合到宿主染色體中,也 可能作為一種游離體(episome)存在。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉入量低但整合率高。外源DNA整合到染色體中概率很小,大約1/104轉染細 胞能整合,通常需要通過一些選擇性標記,如來氨丙基轉移酶(APH;新霉素抗性基因),潮霉素B磷酸轉移酶(HPH),胸苷激酶(TK)等反復篩選,得到 穩定轉染的同源細胞系。

      轉染技術的選擇對轉染結果影響也很大,許多轉染方法需要優化DNA與轉染試劑比例,細胞數量,培養及檢測時間等。

      技術服務:

      磷酸鈣轉染

      磷酸鈣沉淀法是基于磷酸鈣DNA復合物的一種將DNA導入真核細胞的轉染方法,磷酸鈣被認為有利于促進外源DNA與靶細胞表面的結合。磷酸鈣-DNA復合物粘附到細胞膜并通過胞飲作用進入靶細胞,被轉染的DNA可以整合到靶細胞的染色體中從而產生有不同基因型和表型的穩定克隆。這種方法可廣泛用于轉染許多不同類型的細胞,不但適用于短暫表達,也可生成穩定的轉化產物,但該法不適用于原代細胞。磷酸鈣轉染所需的DNA濃度較高,操作簡便但重復性差。在實驗中使用的每種試劑都必須小心校準,保證質量,甚至偏離最優條件十分之一個pH都可能導致磷酸鈣轉染的失敗。

      脂質體轉染

      脂質體為人工膜泡,可作為體內,體外物質轉送載體。將需轉移的DNA或RNA包裹于質脂體,由于質脂體具有磷脂雙層與胞膜相似,因此,可與細胞膜融合,將 DNA轉入宿主細胞。影響轉染效率差異的主要原因是細胞系間個體的差異,有的細胞系細胞膜通透性較好,質脂體復合物較容易進入細胞,轉染效率就高。又有的細胞系本生就不容易被轉染。其次脂類與DNA形成易于轉染結構的特性存在負面效應。其中主要的問題是毒性,表現為細胞聚集在一起,從壁上脫落。另為脂質體轉染易于受到血清中的脂肪與脂蛋白以及細胞外基質中帶店成分,如硫酸軟骨素等干擾引起細胞死亡從而影響轉染效率。

      客戶方需提供:

      1.生長狀況良好的原代細胞、宿主細胞株,一并提供細胞特性,培養條件及相關注意事項。

      2.我們也可以為客戶代為購買細胞并且提供凍存保種服務,客戶需要隨時郵寄。

      3.提供質粒,并說明質粒大小,濃度,抗性,拷貝數等相關背景資料。

      訂購信息
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      電話:400-8822-003
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